Systém RPA-CRISPR/Cas12a v této studii dosahuje rychlé (30–40 minut), ultra{4}}citlivé (1 kopie/μL) detekce HCMV tím, že se zaměřuje na časně-exprimovaný gen UL123, čímž překonává konvenční metody v testování klinických vzorků. Tato inovace umožňuje včasnou diagnostiku pacientů s nízkou -imunosou, virových{10} infekcí a infekcí zdůrazňuje proveditelnost diagnostiky-založené na CRISPR pro zlepšení léčby nemocí souvisejících s HCMV{12}}. Jednoduchost a účinnost testu zvýrazňuje jeho potenciál jako -nástroje{15}}pro péči o zdroje-omezené nastavení.
Vzory míst amplifikace RPA a výběr soupravy.
(A) Návrh primeru RPA týkající se umístění amplifikačních fragmentů. Šipky označují polohy bází od začátku do konce amplifikovaného fragmentu s primery P1-P6.
(B) Obraz RPA produktu amplifikovaného 6 sadami primerů HCMV elektroforézou na agarózovém gelu.
(C) Screening účinnosti amplifikace souprav RPA od různých společností. P: Primer, NC: Negativní kontrola.
Výsledky ukázaly, že souprava AmpFuture vykazovala nejvyšší účinnost amplifikace.
Srovnání pozitivních četností MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method a qPCR v klinických vzorcích.
Odebrali jsme vzorky krve a moči od 48 klinických pacientů. Genomová DNA byla z těchto vzorků extrahována pomocí soupravy TIANamp Genomic DNA Kit a výsledky detekce UL122 byly analyzovány pomocí metody PCR-fluorescenční sondy. Při porovnání našich výsledků s klinickými diagnózami naše metody identifikovaly 6 pozitivních vzorků, které byly v klinických testech negativní.
