Zde zaveďte sCRAM (suboptimální protospacer sousední motiv (PAM)-zprostředkovaná CRISPR RNA a Cas12a nukleáza kombinovaná s multienzymovou izotermickou rychlou amplifikací), rychlou a extrahovanou -bezplatnou diagnostickou platformu, která detekuje ASFV do 20 minut. sCRAM integruje krok rychlého uvolnění nukleové kyseliny (40 stupňů, 5 minut) s jedno-zkumavkovou reakcí kombinující multienzymovou izotermickou amplifikaci (MIRA) a suboptimální PAM-zprostředkovanou CRISPR/
Systém Cas12a (37 stupňů, 15 minut), umožňující bezpřístrojový-vizuální odečet pomocí UV světla nebo laterálních průtokových proužků (LFS). sCRAM demonstruje citlivost detekce jednotlivých kopií a nevykazuje žádnou zkříženou-reaktivitu s pěti běžnými prasečími patogeny (PRRSV, PPV, JEV, PCV a PRV). Vyhodnocení 111 simulovaných a klinických vzorků (včetně krve, plazmy a výtěrů) odhalilo 100% shodu s qPCR pro UV odečet a 98,20 % pro LFS
odečet, přičemž obě metody vykazují 100% specificitu. Jednoduchost, rychlost a přizpůsobivost sCRAM podtrhují jeho potenciál pro decentralizovaný dohled ASFV v nastavení s omezenými-zdroji a nabízí výkonný nástroj pro kontrolu ohniska.
V této studii jsme vyvinuli sCRAM, rychlou a v terénu -nasaditelnou platformu pro detekci ASFV integrující suboptimální PAM{1}}zprostředkované CRISPR/Cas12a s multienzymovou izotermickou amplifikací. Test dosahuje citlivosti jedné-kopie 1 kopie/ul během 20 minut a nevykazuje žádnou zkříženou-reaktivitu s hlavními prasečími patogeny. Klinická validace napříč vzorky krve, plazmy a výtěrů prokázala plnou shodu s qPCR pomocí odečítání UV světla a 98,20% přesností pomocí laterálních průtokových proužků. Díky zjednodušenému ovládání, vysoké citlivosti a specifičnosti a vizuální interpretaci výsledků nabízí sCRAM silný potenciál pro-sledování ASFV na místě a širší{12}}diagnostické aplikace-péče.
